荧光分光光度计原理及结构?【荧光分光光度计原理及结构?】基本原理
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来 。物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光.
不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定 。
在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行 。
基本结构
1. 光源:
为高压汞蒸气灯或氙弧灯,后者能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm~400nm 范围内强度几乎相等,故较常用 。
2.激发单色器:
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器,筛选出特定的激发光谱 。
3.发射单色器:
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器 。筛选出特定的发射光谱 。
4. 样品室:
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成 。测量液体时,光源与检测器成直角安排;测量固体时,光源与检测器成锐角安排 。
5. 检测器:
一般用光电管或光电倍增管作检测器 。可将光信号放大并转为电信号 。
荧光光度计和荧光分光光度计的区别是什么?(工作原理,应用范围等)我觉得主要的两点区别是:
1)荧光分光光度计有两个单色器,而紫外只有一个单色器
2)荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外是成一条直线的 。
除了以上两点之外还有两点区别:3)荧光分光光度计是以氘灯做为光源,而紫外是以氢灯或氘灯作为紫外区光源,钨灯或卤钨灯作为可见光区的光源
4)荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面,而紫外仅为两面为光学面 。
(其实这些都可以咨询科邦实验室了解的,专业人士会有更好的介绍)
有谁知道荧光分光光度计的原理?荧光分光光度计工作原理:
由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪,激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制,当测绘荧光发射光谱时,将激发光单色器的光栅,固定在最适当的激发光波长处,而让荧光单色器凸轮转动,将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即发射光谱(emission
spectrum),简称荧光光谱 。
当测绘荧光激发光谱时,将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处,只让激发光单色口的凸轮转动,将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪,所记录的光谱即激发光谱(emission
spectrum) 。
当进行样品溶液的定量分析时,将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处,将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处,由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度 。
荧光分光光度计和原子荧光分光计的区别荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器 。不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系 。例如现在疫情期间核酸检测就需要荧光光度计;原子荧光则是原子蒸气通过吸收特定波长的光辐射能量而被激发至激发态,受激发原子在去活化过程中发射出一定波长的光辐射成为原子荧光,利用这一物理现象发展起来的分析方法被称为原子荧光光谱分析 。原子荧光光度计主要用来定量分析 。例如SK-乐析原子荧光光度计检测污水中的汞 。(标准《HJ 694-2014 水质 汞、砷、硒、铋和锑的测定 原子荧光法》)
原子荧光原理示意图
简述荧光分光光度计和酶标仪的相同点和不同点分光光度计和酶标仪都是实验室常用的两种仪器,它们的测定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,测定的都是样本的吸光度 。
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